日常水质检测时关于红霉素和青霉素的测定

抗生素相信对于大家来说一点都不陌生，作为一种消炎药物，它被广泛应用于各种病痛的治疗当中，但滥用它的危害也是显而易见的；而且近年来除了欧美国家在地表水当中发现抗生素超标外，我国的一些科研检测人员在对长江和黄河进行抽样检测时也发现了抗生素高含量的现象。而这些抗生素绝大部分是由医疗废水、生活污水、水产养殖废水、动物用药、饲料等，排放进地表水中，而后一部分再经饮用水进入到人体当中。而这也是近年来出台多项水中抗生素类检测标准的原因。今天我们就来讲一下液相色谱-三重四极杆质谱检测水中抗生素的方法。

  此方法检测原理是将采集到的水质样品经0.22pm滤膜过滤，与乙腈1:1混合后进样，用液相色谱-三重四级杆质谱仪测定。根据保留时间和特征离子定性，外标法定量。

检测所用试剂

1.乙腈：色谱纯。

2.甲酸：色谱纯。

3.50%乙腈溶液：取50mL乙腈，用水稀释至100mL。

4.0.1%甲酸水溶液：取lmL甲酸，用水稀释至1000mL。

5.标准品：红霉素,含量≥97.0%；青霉素,含量≥98.0%。

6.红霉素标准贮备液，浓度为100ug/mL。准确称取10.0mg红霉素标准品，用乙腈溶解并稀释成浓度为100ug/mL的标准贮备液；也可直接购买有证标准溶液，在-10℃以下冷冻、避光保存；或参照制造商的产品说明保存，使用时应恢复至室温并摇匀。

7.青霉素标准贮备液，浓度为100ug/mL。准确称取10.0mg青霉素标准品，用50%乙腈溶液溶解并稀释成浓度为100ug/mL的标准贮备液；也可直接购买有证标准溶液，在-10℃以下冷冻、避光保存；或参照制造商的产品说明保存，使用时应恢复至室温并摇匀。

8.红霉素和青霉素混合标准使用液:浓度为10.0ug/mL。分别取红霉素和青霉素标准储备液各1.00mL于10.0mL容量瓶中，用50%乙腈溶液定容，可得到红霉素和青霉素混合标准使用液。

9.滤膜：一次性针头式过滤器，0.22um,混合纤维素酯（MCE）材质。

10.一次性聚丙烯针管。

检测所用仪器

1.液相色谱-三重四级杆质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）,具备梯度洗脱和多反应监测功能。

2.分析天平：感量为0.0001g。

3.样品瓶：100mL磨口或带聚四氟乙烯内衬垫瓶盖的棕色玻璃瓶。

4.微量注射器或移液器：10ul、50ul、100ul、500ul、1.0mL。

水样的采集和制备

  我们可以按照相关规定进行水质样品的釆集。水样釆集时应充满样品瓶，不留空隙。在4℃以下冷藏、避光保存。2d内完成分析。

水样的制备

  水样需充分混匀，取约10mL样品经0.22um滤膜过滤，弃去至少1mL初滤液后，准确移取500uL过滤后的样品于棕色进样瓶中，再加入500uL乙腈，混匀后待测。

空白水样的制备

  用实验室一级纯水代替水样，然后按照水样的制备步骤对空白水样进行操作。

检测步骤

液相色谱条件

  色谱柱为C18（100mmX2.1mm,粒径1.7um），或相当者；流动相为A：乙腈，B：0.1%甲酸水溶液；流速为0.25mL/min；柱温为30°℃；进样体积为10uL；流动相梯度洗脱程序可以参考相应图表。

质谱条件

  离子源为电喷雾离子源（ESI）;扫描方式为正离子模式；监测方式为多反应监测（MRM）；去溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体；

标准曲线的建立

  移取适量的红霉素和青霉素混合标准使用液，用50%乙腈溶液稀释，配制至少5个浓度点的标准系列溶液，标准溶液中红霉素和青霉素的参考浓度质量浓度分别为0.100ug/L、0.200ug/L、0.500ug/L、1.00ug/L、2.00ug/L、5.00ug/L、10.0ug/L和20.0ug/L,移取1.0mL标准系列溶液于棕色进样瓶中，待测。按照规定中的仪器条件，由低浓度到高浓度依次对标准系列溶液进行测定。以目标化合物的质量浓度（ug/L）为横坐标，以其对应的响应值为纵坐标，建立标准曲线。

水样的测定

  将准备好的水样按照规定中的仪器条件进行测定。

  定性分析可以在同一色谱/质谱条件下对标准溶液和试样进行测定，根据标准溶液色谱图的保留时间与试样的保留时间、标准溶液各色谱峰的特征离子与试样各色谱峰的特征离子相对照定性。试样与标准物质保留时间的相对偏差不大于5%。试样中目标化合物定性子离子的相对丰度(Ksam）。与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度（Kskd）进行比较,相对丰度偏差不超过相关图表规定的范围，则可判定样品中存在对应的目标化合物。

  而水样中红霉素、青霉素的质量浓度可以直接按照公式进行计算得出。